■ 基本信息
別名: | pET28a |
啟動(dòng)子: | T7 |
復(fù)制子: | pBR322 |
終止子: | T7 terminator |
質(zhì)粒分類: | 大腸系列質(zhì)粒；大腸表達(dá)質(zhì)粒；pET系列質(zhì)粒 |
質(zhì)粒大小: | 5369bp |
質(zhì)粒標(biāo)簽: | N-6×His, N-Thrombin, N-T7, C-6×His |
原核抗性: | Kan |
克隆菌株: | DH5a |
培養(yǎng)條件: | 37℃，有氧，LB |
表達(dá)宿主: | 大腸桿菌BL21(DE3) |
誘導(dǎo)方式: | IPTG或乳糖及其類似物 |
5'測(cè)序引物: | T7：TAATACGACTCACTATAGGG |
3'測(cè)序引物: | T7-ter：TGCTAGTTATTGCTCAGCGG |
■ 質(zhì)粒屬性
質(zhì)粒宿主: | 大腸桿菌 |
質(zhì)粒用途: | 蛋白表達(dá) |
片段類型: | ORF
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片段物種: | 空載體
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原核抗性: | Kan |
真核抗性: |
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熒光標(biāo)記: |
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■ 質(zhì)粒簡(jiǎn)介
pET-28a質(zhì)粒是一種原核表達(dá)載體，C端含有一個(gè)6×His標(biāo)簽，N端含有6×His標(biāo)簽、thrombin酶切位點(diǎn)、T7標(biāo)簽。該質(zhì)粒含有多個(gè)常用的酶切位點(diǎn)，便于不同基因克隆。表達(dá)由宿主細(xì)胞提供的T7 RNA聚合酶誘導(dǎo)，目的基因被克隆到質(zhì)粒載體上，受噬菌體強(qiáng)轉(zhuǎn)錄及翻譯信號(hào)控制。pET28a載體的單一的多克隆位點(diǎn)見(jiàn)上面的環(huán)狀質(zhì)粒圖譜。注意：載體序列是以pBR322質(zhì)粒的編碼規(guī)矩進(jìn)行編碼的，所以T7蛋白表達(dá)區(qū)在質(zhì)粒圖譜上面是反向的。T7 RNA聚合酶啟動(dòng)的克隆和表達(dá)區(qū)域在質(zhì)粒圖譜中也被標(biāo)注了出來(lái)。質(zhì)粒的F1復(fù)制子是被定向的，所以在T7噬菌體聚合酶的作用下，包含有蛋白編碼序列的病毒粒子能夠產(chǎn)生，并啟動(dòng)蛋白表達(dá)，同時(shí)蛋白表達(dá)將被T7終止子序列的作用下終止蛋白翻譯。pET系統(tǒng)是有史以來(lái)在大腸桿菌中表達(dá)重組蛋白的功能最強(qiáng)大的系統(tǒng)，也是現(xiàn)今原核表達(dá)方面使用最廣泛的系統(tǒng)。該系列質(zhì)粒能很容易的通過(guò)降低誘導(dǎo)物的濃度來(lái)削弱蛋白表達(dá)。在非誘導(dǎo)條件下，可以使目的基因處于完全沉默狀態(tài)而不轉(zhuǎn)錄。 質(zhì)粒只保證關(guān)鍵序列正確，不保證表達(dá)效果。
■ 質(zhì)粒圖譜
■ 質(zhì)粒序列
質(zhì)粒序列請(qǐng)下載：
ZK159pET-28a大腸表達(dá)質(zhì)粒.txt
