■ 基本信息
別名: | pUC-18 |
啟動(dòng)子: | Lac/lac promoter |
復(fù)制子: | pUC |
質(zhì)粒大小: | 2686bp |
質(zhì)粒標(biāo)簽: | LacZ |
原核抗性: | Amp |
克隆菌株: | DH5a |
培養(yǎng)條件: | 37度 |
5'測(cè)序引物: | M13F:TGTAAAACGACGGCCAGT |
3'測(cè)序引物: | M13R:CAGGAAACAGCTATGACC |
■ 質(zhì)粒屬性
質(zhì)粒宿主: | 大腸桿菌 |
質(zhì)粒用途: | 基因模板 |
片段類(lèi)型: | cDNA
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片段物種: | 空載體
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原核抗性: | Amp |
真核抗性: |
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熒光標(biāo)記: |
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■ 質(zhì)粒簡(jiǎn)介
pUC18是適合于雙脫氧法DNA測(cè)序的載體，通常運(yùn)用于重組dna的分子克隆中，首先我們制備大腸桿菌的感受態(tài)細(xì)胞（能接受外來(lái)重組的dna），這種感受態(tài)菌株必須不同外來(lái)DNA分子發(fā)生遺傳重組，通常是rec基因缺陷型的突變體，同時(shí)它們必須是限制系統(tǒng)缺陷或限制與修飾系統(tǒng)均缺陷的菌株，即具有這三種缺陷（rk mk rec ），同時(shí)對(duì)氨芐青霉素敏感（ap）。
puc18載體自身帶有抗氨芐青霉素基因，而外源片段不具有，這樣只有帶有puc18的轉(zhuǎn)化子的菌株才能在氨芐青霉素平板上存活，而外源片段自身環(huán)化的不能存活，這稱(chēng)為抗性篩選。
pUC18 上帶有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的調(diào)控序列和β-半乳糖苷酶N 端146 個(gè)氨基酸的編碼序列，在這個(gè)編碼區(qū)中插有一個(gè)多克隆位點(diǎn)，且不影響正常功能，DH5α感受態(tài)菌株帶有β-半乳糖苷酶C 端部分序列的編碼信息，當(dāng)puc18載體在正常情況下同感受態(tài)菌株融合后，互補(bǔ)表達(dá)有活性的β-半乳糖苷酶，稱(chēng)為α-互補(bǔ)現(xiàn)象，當(dāng)有外源片段插入多克隆位點(diǎn)后，不能產(chǎn)生互補(bǔ)，即細(xì)菌不能產(chǎn)生β-半乳糖苷酶活性。在呈色底物X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷酶）和誘導(dǎo)物IPTG（異丙基-β-D-硫代半乳糖苷）的存在下，互補(bǔ)產(chǎn)物菌落呈現(xiàn)藍(lán)色，不互補(bǔ)產(chǎn)物菌落呈白色，很容易鑒別，這種篩選方法稱(chēng)為α-互補(bǔ)現(xiàn)象篩選(藍(lán)白斑篩選)。由上可見(jiàn)，puc18載體除了能重組導(dǎo)入外源片段外，在篩選表達(dá)過(guò)程中還具有重要的作用。質(zhì)粒只保證關(guān)鍵序列正確，不保證表達(dá)效果。
■ 質(zhì)粒圖譜
■ 質(zhì)粒序列
質(zhì)粒序列可參考（具體以測(cè)序?yàn)闇?zhǔn)）下載：
ZK110 pUC18大腸克隆質(zhì)粒.txt
