■ 產(chǎn)品介紹
Y2HGold菌株是Clontech公司開發(fā)的GAL4系統(tǒng)酵母雙雜實(shí)驗(yàn)用菌株，MATa型，可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)?；蚺cMATα型酵母菌株Y187通過mating操作進(jìn)行蛋白互作驗(yàn)證或篩庫試驗(yàn)。Transformation marker為: trp1, leu2，報(bào)告基因?yàn)椋篈bAr, HIS3, ADE2, MEL1。 Y2HGold-GAL4酵母雙雜系統(tǒng)需要兩種質(zhì)粒配套使用：PGBKT7和PGADT7。質(zhì)粒PGBKT7的篩選標(biāo)志為TRP1，用于表達(dá)DNA-BD(來自酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4N端1~174位氨基酸)與目標(biāo)蛋白(Bait)的融合蛋白；質(zhì)粒PGADT7的篩選標(biāo)志為LEU，用于表達(dá)AD(GAL4 C端768~881位氨基酸)與目標(biāo)蛋白（Prey）的融合蛋白。GAL4系統(tǒng)原理：一個(gè)完整的酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4可分為功能上相互獨(dú)立的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域：位于N端1~174位氨基酸區(qū)段的DNA結(jié)合域（DNA-BD）和位于C端768~881位氨基酸區(qū)段的轉(zhuǎn)錄激活域(AD)。DNA-BD能夠識(shí)別GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并與之結(jié)合。而AD可以啟動(dòng)UAS下游的基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。BD和AD單獨(dú)存在不能激活轉(zhuǎn)錄，但當(dāng)二者接近時(shí)，則呈現(xiàn)完整的GAL4活性，使含有UAS的啟動(dòng)子下游基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)。正常條件下，BD不與AD結(jié)合，將要檢測(cè)的蛋白質(zhì)分別與BD和AD融合，形成bait 融合蛋白（bait-BD）和prey融合蛋白（prey-AD），如果bait和prey發(fā)生相互作用，就會(huì)促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，從而激活報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄。 Y2HGold有四個(gè)報(bào)告基因：AbAr, HIS3, ADE2, MEL1，分別由三種不同的啟動(dòng)子（G1，G2，M1）啟動(dòng)，這三種啟動(dòng)子只有GAL4識(shí)別的17bp核心區(qū)相同，其余部分均不同，大大降低了酵母雙雜假陽性發(fā)生的概率。此外新報(bào)告基因AbAr與以前的營養(yǎng)缺陷報(bào)告基因相比具有更低背景的優(yōu)點(diǎn)，也可以降低酵母雙雜假陽性發(fā)生的概率。 |
基因型： | MATa,trp1-901,leu2-3,112,ura3-52,his3-200,gal4Δ,gal80Δ,LYS2::GAL1UAS-Gal1TATA-His3,GAL2UAS-Gal2TATA-Ade2URA3: :MEL1UAS-Mel1TATAAUR1-C MEL1 |
■ 基本信息
培養(yǎng)基: | YPD/YPDA |
菌株類別: | 酵母菌 |
培養(yǎng)條件: | 28℃，有氧，YPD/YPDA |
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化: | 電激/42℃熱激 |
保存方式: | 30%甘油，-80℃ |
基本應(yīng)用: | 用于酵母雙雜交 |
■ 使用方法
收到菌液及時(shí)四區(qū)劃線活化，挑取單克隆在YPD中培養(yǎng)到生長對(duì)數(shù)中后期加入終濃度30%無菌甘油保種，分裝置于-80℃保存，避免反復(fù)化凍。建議超凈臺(tái)內(nèi)劃線涂板，避免雜菌污染。
■ 注意事項(xiàng)
1. 酵母菌在YPD培養(yǎng)基上會(huì)變粉，是正?，F(xiàn)象，可以由此特性鑒別是否為酵母菌。
2. 酵母菌種化凍1-2次活性下降，不建議直接長期保存。
3. 活化保種的種管建議分裝保存，反復(fù)凍融菌株活力下降。
4. 本產(chǎn)品僅可用于實(shí)驗(yàn)室研究，不能用于動(dòng)物，人體以及作為食品添加劑等用途。
5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
